Resumen El objetivo fue evaluar tres formulaciones de estradiol (E2) [5 mg de 17β (E17), 1 mg de benzoato (EB) y 1 mg de cipionato (ECP)] y dos presentaciones de la progesterona (P4) - dispositivo intravaginal (DIV) con 558 mg de P4 y 200 mg de P4 parenteral (MAD-4) - en un protocolo de sincronización de la ovulación. Se seleccionaron 30 vacas Holando en ordeñe que fueron presincronizadas con una combinación de GnRH y prostaglandina (PG) administradas con siete días de intervalo y que manifestaron celo en el mismo día; a los 10 días de éste se formaron 6 grupos (n=5 c/u): 1) DIV + EB: día 0: DIV + EB; Día 8: PG y retiro del DIV; Día 9: EB. 2) DIV + E17: día 0: DIV + E17; Día 8: PG y retiro del DIV; Día 9: E17. 3) DIV + ECP: día 0: DIV + ECP; Día 8: PG y retiro del DIV + ECP. 4) MAD-4 + EB: día 0: MAD-4 + EB; Día 8: PG; Día 9: EB. 5) MAD-4 + E17: día 0: MAD-4 + E17; Día 8: PG; Día 9: E17. 6) MAD-4 + ECP: día 0: MAD-4 + ECP; Día 8: PG + ECP. La respuesta fue evaluada por los niveles plasmáticos de E2, P4 y ecografía ovárica. Las concentraciones máximas de P4 se registraron una hora después del tratamiento (7,3±0,7 ng/mL DIV y 16,1±0,7 ng/mL MAD-4; P<0,0001); seis horas más tarde se redujeron a 5,7±0,7 ng/mL DIV y 11,2±0,7 ng/mL MAD-4 respectivamente (P<0.0001). Las concentraciones de E2 alcanzaron un máximo 4 horas después del tratamiento para grupos E17 y EB y 28 h después del tratamiento para grupos de ECP. Las concentraciones máximas fueron E17: 641,5±11,5 pg/mL, EB: 166,5±11,5 pg/mL y ECP: 45,6±10,9 pg/mL (P<0,0001). E2 volvió a los niveles iniciales 40 horas más tarde en grupos E17 y EB y 80 horas en grupos de ECP. Los diámetros foliculares en el día 8, fueron 14,9±1,4 y 14,4±1,3 mm para las vacas EB y E17 y 10,9±1,4 para los animales ECP (P<0,05). La ovulación ocurrió más temprano en los grupos EB y el porcentaje de vacas ovulando fue 88,9% en E17, 66,7% en EB y 30,0% en ECP (P<0,05). Abstract The objective was to evaluate three estradiol (E2) formulations [5 mg of 17β (E17), 1 mg of benzoate (EB) and 1 mg of cypionate (ECP)] and two presentations of progesterone (P4) - intravaginal device (DIV) with 558 mg of P4 200 mg of P4 parenteral (MAD-4) - in an ovulation synchronization protocol. Thirty lactating Holstein cows were presynchronized with a combination of GnRH and Prostaglandin (PG) given seven days apart and responding with a standing heat on the same day were selected; 10 days 6 groups were formed (n=5 each): 1) DIV+EB: Day 0: DIV + EB; Day 8: PG and DIV withdraw; Day 9: EB. 2) DIV+E17: Day 0: DIV + E17; Day 8: PG and DIV withdraw; Day 9: E17. 3) DIV+ECP: Day 0: DIV + ECP; Day 8: PG, DIV withdraw + ECP. 4) MAD-4+EB: Day 0: MAD-4 + EB; Day 8: PG; Day 9: EB. 5) MAD-4 + E17: Day 0: MAD-4 + E17; Day 8: PG; Day 9: E17. 6) MAD-4 + ECP: Day 0: MAD-4 + ECP; Day 8: PG + ECP. The response was evaluated by plasma levels of E2 and P4 and ovarian ultrasonography. The maximum average P4 concentrations were reached one hour after the treatment (7.3±0.7 ng/mL DIV and 16.1±0.7 ng/mL MAD-4; P<0.0001); six hours later were reduced to 11.2±0.7 ng/mL DIV and 5.7±0.7 ng/mL MAD-4 respectively (P<0.0001). E2 concentrations reached a maximum 4 hours after treatment for E17 and EB groups and 28 h after treatment for ECP groups. Maximum average concentrations were E17: 641.5±11.5 pg/mL, EB: 166.5±11.5 pg/mL and ECP: 45.6±10.9 pg/mL (P<0.0001). E2 returned to baseline levels 40 hours later in E17 and EB groups and 80 hours in ECP groups. The average follicular diameters at the Day 8 were 14.9±1.4 and 14.4±1.3 mm for the EB and E17 cows and 10.9±1.4 for the ECP animals (P<0.05). Ovulation occurred earlier in E17 and was 88.9% in EB, 66.7% in E17 and 30.0% to ECP (P<0.05).