La protéine 4-2 (Nedd4-2) à régulation négative du développement, exprimée par les cellules précurseurs neuronales, induit l'internalisation /la dégradation des sous-unités du canal Na+ épithélial (α-, β- et γ-ENaC). La kinase 1 inductible par le sérum / glucocorticoïde (SGK1) et la protéine kinase A (PKA) semblent toutes deux inhiber ce processus en phosphorylant Nedd4-2-Ser221, -Ser327 et -Thr246. Ce processus d'inactivation de Nedd4-2 est considéré comme central pour le contrôle hormonal de l'absorption de Na+. La présente étude des cellules épithéliales des voies respiratoires humaines H441 explore donc les effets de SGK1 et / ou PKA sur la phosphorylation / abondance de Nedd4-2 endogène ; l'expression de surface des sous-unités ENaC et le transport électrogène de Na+. Les effets sur la phosphorylation/abondance de Nedd4-2 et l'expression de surface de l'ENaC ont été surveillés par analyse occidentale, tandis que l'absorption de Na+ a été quantifiée électrométriquement. L'activation aiguë (20 min) du PKA dans les cellules privées de glucocorticoïdes (24 h) a augmenté l'abondance de Nedd4-2 phosphorylé par Ser221, de Nedd4-2 phosphorylé par Ser327 et de Nedd4-2 total sans modifier l'abondance de Nedd4-2 phosphorylé par Thr246. L'activation du PKA dans ces conditions n'a pas provoqué d'augmentation coordonnée de l'abondance de surface de l'α-, β- et γ-ENaC et n'a eu qu'un très faible effet sur l'absorption électrogénique du Na+. L'activation de PKA (20 min) dans les cellules traitées aux glucocorticoïdes (0,2 µM dexaméthasone, 24 h), d'autre part, a augmenté l'abondance de Ser221-, Ser327- et Thr246-phosphorylé et de Nedd4-2 total ; a augmenté l'abondance de surface de α-, β- et γ-ENaC et a évoqué une stimulation claire du transport de Na+. La stimulation glucocorticoïde chronique semble donc permettre un contrôle dépendant de l'AMPc de l'absorption du Na+ en facilitant les effets du PKA sur les sous-unités Nedd4-2 et ENaC.

La proteína 4-2 (Nedd4-2) expresada en células precursoras neurales, regulada negativamente en el desarrollo, media la internalización / degradación de las subunidades de los canales de Na+ epiteliales (α-, β- y γ-ENaC). La quinasa 1 inducible por suero / glucocorticoides (SGK1) y la proteína quinasa A (PKA) parecen inhibir este proceso mediante la fosforilación de Nedd4-2-Ser221, -Ser327 y -Thr246. Se cree que este proceso de inactivación de Nedd4-2 es fundamental para el control hormonal de la absorción de Na+. Por lo tanto, el presente estudio de células epiteliales de las vías respiratorias humanas H441 explora los efectos de SGK1 y / o PKA sobre la fosforilación / abundancia de Nedd4-2 endógeno; la expresión superficial de subunidades ENaC y el transporte electrogénico de Na+. Los efectos sobre la fosforilación/abundancia de Nedd4-2 y la expresión superficial de ENaC se controlaron mediante análisis Western, mientras que la absorción de Na+ se cuantificó electrométricamente. La activación aguda (20 min) de PKA en células privadas de glucocorticoides (24 h) aumentó la abundancia de Nedd4-2 fosforilado en Ser221, fosforilado en Ser327 y total sin alterar la abundancia de Nedd4-2 fosforilado en Thr246. La activación de PKA en estas condiciones no causó un aumento coordinado en la abundancia superficial de α-, β- y γ-ENaC y tuvo solo un efecto muy pequeño sobre la absorción electrogénica de Na+. La activación de PKA (20 min) en células tratadas con glucocorticoides (dexametasona 0.2 µM, 24 h), por otro lado, aumentó la abundancia de Ser221-, Ser327- y Thr246-fosforilado y Nedd4-2 total; aumentó la abundancia superficial de α-, β- y γ-ENaC y evocó una clara estimulación del transporte de Na+. Por lo tanto, la estimulación crónica con glucocorticoides parece permitir el control dependiente de cAMP de la absorción de Na+ al facilitar los efectos de PKA sobre las subunidades Nedd4-2 y ENaC.

Neural precursor cell expressed, developmentally down-regulated protein 4-2 (Nedd4-2) mediates the internalisation / degradation of epithelial Na+ channel subunits (α-, β- and γ-ENaC). Serum / glucocorticoid inducible kinase 1 (SGK1) and protein kinase A (PKA) both appear to inhibit this process by phosphorylating Nedd4-2-Ser221, -Ser327 and -Thr246. This Nedd4-2 inactivation process is thought to be central to the hormonal control of Na+ absorption. The present study of H441 human airway epithelial cells therefore explores the effects of SGK1 and / or PKA upon the phosphorylation / abundance of endogenous Nedd4-2; the surface expression of ENaC subunits, and electrogenic Na+ transport. Effects on Nedd4-2 phosphorylation/abundance and the surface expression of ENaC were monitored by western analysis, whilst Na+ absorption was quantified electrometrically. Acutely (20 min) activating PKA in glucocorticoid-deprived (24 h) cells increased the abundance of Ser221-phosphorylated, Ser327-phosphorylated and total Nedd4-2 without altering the abundance of Thr246-phosphorylated Nedd4-2. Activating PKA under these conditions did not cause a co-ordinated increase in the surface abundance of α-, β- and γ-ENaC and had only a very small effect upon electrogenic Na+ absorption. Activating PKA (20 min) in glucocorticoid-treated (0.2 µM dexamethasone, 24 h) cells, on the other hand, increased the abundance of Ser221-, Ser327- and Thr246-phosphorylated and total Nedd4-2; increased the surface abundance of α-, β- and γ-ENaC and evoked a clear stimulation of Na+ transport. Chronic glucocorticoid stimulation therefore appears to allow cAMP-dependent control of Na+ absorption by facilitating the effects of PKA upon the Nedd4-2 and ENaC subunits.

تتوسط الخلية السليفة العصبية المعبر عنها، البروتين منخفض التنظيم من الناحية التنموية 4-2 (Nedd4 -2)، استبطان/ تدهور الوحدات الفرعية لقناة Na+ الظهارية (α - وβ - وγ - ENaC). يبدو أن كيناز المصل / الكورتيكويد السكري القابل للحث 1 (SGK1) وكيناز البروتين A (PKA) يثبطان هذه العملية عن طريق فسفرة Nedd4 -2 - Ser221 و - Ser327 و - Thr246. يُعتقد أن عملية تعطيل Nedd4 -2 هذه أساسية للتحكم الهرموني في امتصاص الصوديوم. لذلك تستكشف الدراسة الحالية للخلايا الظهارية لمجرى الهواء البشري H441 آثار SGK1 و / أو PKA على فسفرة / وفرة Nedd4 -2 الذاتية ؛ التعبير السطحي للوحدات الفرعية ENaC، ونقل Na+ الكهربائي. تمت مراقبة التأثيرات على فسفرة/وفرة Nedd4 -2 والتعبير السطحي لـ ENaC من خلال التحليل الغربي، في حين تم قياس امتصاص Na+ كهرومغناطيسيًا. بشكل حاد (20 دقيقة) تنشيط PKA في الخلايا المحرومة من القشرانيات السكرية (24 ساعة) زاد من وفرة Ser221 - phosphorylated، Ser327 - phosphorylated و Nedd4 -2 الكلي دون تغيير وفرة Nedd4 -2 Thr246 - phosphorylated. لم يتسبب تنشيط PKA في ظل هذه الظروف في زيادة منسقة في الوفرة السطحية لـ α - و β - و γ - ENaC ولم يكن له سوى تأثير صغير جدًا على امتصاص Na+ الكهربائي. تنشيط PKA (20 دقيقة) في الخلايا المعالجة بالقشرانيات السكرية (0.2 ميكرومتر ديكساميثازون، 24 ساعة)، من ناحية أخرى، زاد من وفرة Ser221 - و Ser327 - و Thr246 - phosphorylated و Nedd4 -2 الكلي ؛ زاد من وفرة سطح α - و β - و γ - ENaC وأثار تحفيزًا واضحًا لنقل Na+. لذلك يبدو أن تحفيز القشرانيات السكرية المزمن يسمح بالتحكم المعتمد على المخيم في امتصاص Na+ من خلال تسهيل تأثيرات PKA على الوحدات الفرعية Nedd4 -2 و ENaC.