La surexpression de PKC ?, une kinase associée à l'agressivité tumorale et largement impliquée dans la transformation maligne et les métastases, est une caractéristique de plusieurs cancers, y compris les cancers du sein, de la prostate et du poumon. Pour caractériser les mécanismes qui contrôlent l'expression de la PKC ? et sa régulation positive dans le cancer, nous avons cloné un segment promoteur d'environ1,6 kb du gène humain PKC ? (PRKCE) qui présente une activité transcriptionnelle élevée dans les cellules cancéreuses. Une analyse délétionnelle complète a établi deux régions riches en sites Sp1 et STAT1 situées entre −777 et −105 pb (région A) et −921 et −796 pb (région B), respectivement, comme responsables de la forte activité transcriptionnelle observée dans les cellules cancéreuses. Une analyse de mutagénèse plus détaillée suivie par l'EMSA et la ChIP a identifié les sites Sp1 en positions −668/− 659 et − 269/−247 ainsi que les sites STAT1 en positions −880/−869 et −793/−782 comme les éléments responsables de l'activité promotrice élevée dans les cellules cancéreuses du sein par rapport aux cellules épithéliales mammaires normales. Le silençage par l'ARNi de Sp1 et STAT1 dans les cellules cancéreuses du sein a réduit l'expression de l'ARNm et des protéines de la PKC, ainsi que l'activité du promoteur de la PRKCE. De plus, une forte corrélation a été mise en évidence entre les taux de phospho-Ser-727 (actif) STAT1 dans les cellules cancéreuses du sein. Nos résultats peuvent avoir des implications significatives pour le développement d'approches visant à cibler la PKC et ses effecteurs dans le traitement du cancer. La surexpression de PKC ?, une kinase associée à l'agressivité tumorale et largement impliquée dans la transformation maligne et les métastases, est une caractéristique de plusieurs cancers, y compris les cancers du sein, de la prostate et du poumon. Pour caractériser les mécanismes qui contrôlent l'expression de la PKC ? et sa régulation positive dans le cancer, nous avons cloné un segment promoteur d'environ1,6 kb du gène humain PKC ? (PRKCE) qui présente une activité transcriptionnelle élevée dans les cellules cancéreuses. Une analyse délétionnelle complète a établi deux régions riches en sites Sp1 et STAT1 situées entre −777 et −105 pb (région A) et −921 et −796 pb (région B), respectivement, comme responsables de la forte activité transcriptionnelle observée dans les cellules cancéreuses. Une analyse de mutagénèse plus détaillée suivie par l'EMSA et la ChIP a identifié les sites Sp1 en positions −668/− 659 et − 269/−247 ainsi que les sites STAT1 en positions −880/−869 et −793/−782 comme les éléments responsables de l'activité promotrice élevée dans les cellules cancéreuses du sein par rapport aux cellules épithéliales mammaires normales. Le silençage par l'ARNi de Sp1 et STAT1 dans les cellules cancéreuses du sein a réduit l'expression de l'ARNm et des protéines de la PKC, ainsi que l'activité du promoteur de la PRKCE. De plus, une forte corrélation a été mise en évidence entre les taux de phospho-Ser-727 (actif) STAT1 dans les cellules cancéreuses du sein. Nos résultats peuvent avoir des implications significatives pour le développement d'approches visant à cibler la PKC et ses effecteurs dans le traitement du cancer.

La sobreexpresión de PKCl, una quinasa asociada con la agresividad tumoral y ampliamente implicada en la transformación maligna y la metástasis, es un sello distintivo de múltiples cánceres, incluidos el cáncer de mama, próstata y pulmón. Para caracterizar los mecanismos que controlan la expresión de PKC? y su regulación positiva en el cáncer, clonamos un segmento promotor de ∼1.6 kb del gen PKC? humano (PRKCE) que muestra una actividad transcripcional elevada en las células cancerosas. Un análisis de deleción exhaustivo estableció dos regiones ricas en sitios Sp1 y STAT1 ubicados entre -777 y -105 pb (región A) y -921 y -796 pb (región B), respectivamente, como responsables de la alta actividad transcripcional observada en las células cancerosas. Un análisis de mutagénesis más detallado seguido de EMSA y ChIP identificó los sitios Sp1 en las posiciones -668/-659 y -269/-247, así como los sitios STAT1 en las posiciones -880/-869 y -793/-782 como los elementos responsables de la actividad promotora elevada en las células de cáncer de mama en relación con las células epiteliales mamarias normales. El silenciamiento de ARNi de Sp1 y STAT1 en células de cáncer de mama redujo la expresión de ARNm y proteínas de PKCR, así como la actividad del promotor PRKCE. Además, se encontró una fuerte correlación entre los niveles de PKCl y fosfo-Ser-727 (activo) STAT1 en células de cáncer de mama. Nuestros resultados pueden tener implicaciones significativas para el desarrollo de enfoques para dirigirse a PKCC y sus efectores en la terapéutica del cáncer. La sobreexpresión de PKCl, una quinasa asociada con la agresividad tumoral y ampliamente implicada en la transformación maligna y la metástasis, es un sello distintivo de múltiples cánceres, incluidos el cáncer de mama, próstata y pulmón. Para caracterizar los mecanismos que controlan la expresión de PKC? y su regulación positiva en el cáncer, clonamos un segmento promotor de ∼1.6 kb del gen PKC? humano (PRKCE) que muestra una actividad transcripcional elevada en las células cancerosas. Un análisis de deleción exhaustivo estableció dos regiones ricas en sitios Sp1 y STAT1 ubicados entre -777 y -105 pb (región A) y -921 y -796 pb (región B), respectivamente, como responsables de la alta actividad transcripcional observada en las células cancerosas. Un análisis de mutagénesis más detallado seguido de EMSA y ChIP identificó los sitios Sp1 en las posiciones -668/-659 y -269/-247, así como los sitios STAT1 en las posiciones -880/-869 y -793/-782 como los elementos responsables de la actividad promotora elevada en las células de cáncer de mama en relación con las células epiteliales mamarias normales. El silenciamiento de ARNi de Sp1 y STAT1 en células de cáncer de mama redujo la expresión de ARNm y proteínas de PKCR, así como la actividad del promotor PRKCE. Además, se encontró una fuerte correlación entre los niveles de PKCl y fosfo-Ser-727 (activo) STAT1 en células de cáncer de mama. Nuestros resultados pueden tener implicaciones significativas para el desarrollo de enfoques para dirigirse a PKCC y sus efectores en la terapéutica del cáncer.

Overexpression of PKCϵ, a kinase associated with tumor aggressiveness and widely implicated in malignant transformation and metastasis, is a hallmark of multiple cancers, including mammary, prostate, and lung cancer. To characterize the mechanisms that control PKCϵ expression and its up-regulation in cancer, we cloned an ∼1.6-kb promoter segment of the human PKCϵ gene (PRKCE) that displays elevated transcriptional activity in cancer cells. A comprehensive deletional analysis established two regions rich in Sp1 and STAT1 sites located between −777 and −105 bp (region A) and −921 and −796 bp (region B), respectively, as responsible for the high transcriptional activity observed in cancer cells. A more detailed mutagenesis analysis followed by EMSA and ChIP identified Sp1 sites in positions −668/−659 and −269/−247 as well as STAT1 sites in positions −880/−869 and −793/−782 as the elements responsible for elevated promoter activity in breast cancer cells relative to normal mammary epithelial cells. RNAi silencing of Sp1 and STAT1 in breast cancer cells reduced PKCϵ mRNA and protein expression, as well as PRKCE promoter activity. Moreover, a strong correlation was found between PKCϵ and phospho-Ser-727 (active) STAT1 levels in breast cancer cells. Our results may have significant implications for the development of approaches to target PKCϵ and its effectors in cancer therapeutics. Overexpression of PKCϵ, a kinase associated with tumor aggressiveness and widely implicated in malignant transformation and metastasis, is a hallmark of multiple cancers, including mammary, prostate, and lung cancer. To characterize the mechanisms that control PKCϵ expression and its up-regulation in cancer, we cloned an ∼1.6-kb promoter segment of the human PKCϵ gene (PRKCE) that displays elevated transcriptional activity in cancer cells. A comprehensive deletional analysis established two regions rich in Sp1 and STAT1 sites located between −777 and −105 bp (region A) and −921 and −796 bp (region B), respectively, as responsible for the high transcriptional activity observed in cancer cells. A more detailed mutagenesis analysis followed by EMSA and ChIP identified Sp1 sites in positions −668/−659 and −269/−247 as well as STAT1 sites in positions −880/−869 and −793/−782 as the elements responsible for elevated promoter activity in breast cancer cells relative to normal mammary epithelial cells. RNAi silencing of Sp1 and STAT1 in breast cancer cells reduced PKCϵ mRNA and protein expression, as well as PRKCE promoter activity. Moreover, a strong correlation was found between PKCϵ and phospho-Ser-727 (active) STAT1 levels in breast cancer cells. Our results may have significant implications for the development of approaches to target PKCϵ and its effectors in cancer therapeutics.

يعد التعبير المفرط عن PKCi، وهو كيناز مرتبط بعدوانية الورم ومتورط على نطاق واسع في التحول الخبيث والانبثاث، سمة مميزة لسرطانات متعددة، بما في ذلك سرطان الثدي والبروستاتا والرئة. لتوصيف الآليات التي تتحكم في تعبير PKCi وزيادة تنظيمه في السرطان، قمنا باستنساخ شريحة معزز 1.6 كيلو بايت من جين PKCi البشري (PRKCE) الذي يعرض نشاط نسخ مرتفع في الخلايا السرطانية. حدد تحليل شامل للحذف منطقتين غنيتين بمواقع SP1 و STAT1 تقعان بين -777 و -105 نقطة أساس (المنطقة A) و -921 و -796 نقطة أساس (المنطقة B)، على التوالي، كمسؤولتين عن النشاط النسخي العالي الملحوظ في الخلايا السرطانية. حدد تحليل الطفرات الأكثر تفصيلاً متبوعًا بـ EMSA و ChIP مواقع Sp1 في المواضع -668/-659 و -269/-247 بالإضافة إلى مواقع STAT1 في المواضع -880/-869 و -793/-782 كعناصر مسؤولة عن نشاط المحفز المرتفع في خلايا سرطان الثدي بالنسبة للخلايا الظهارية الثديية الطبيعية. أدى إسكات الحمض النووي الريبي لـ Sp1 و STAT1 في خلايا سرطان الثدي إلى تقليل PKCi mRNA والتعبير البروتيني، بالإضافة إلى نشاط معزز PRKCE. علاوة على ذلك، تم العثور على علاقة قوية بين مستويات PKCi و phospho - Ser -727 (نشط) STAT1 في خلايا سرطان الثدي. قد يكون لنتائجنا آثار كبيرة على تطوير مناهج لاستهداف بي كي سي أو ومستجيباته في علاجات السرطان. يعد التعبير المفرط عن PKCi، وهو كيناز مرتبط بعدوانية الورم ومتورط على نطاق واسع في التحول الخبيث والانبثاث، سمة مميزة لسرطانات متعددة، بما في ذلك سرطان الثدي والبروستاتا والرئة. لتوصيف الآليات التي تتحكم في تعبير PKCi وزيادة تنظيمه في السرطان، قمنا باستنساخ شريحة معزز 1.6 كيلو بايت من جين PKCi البشري (PRKCE) الذي يعرض نشاط نسخ مرتفع في الخلايا السرطانية. حدد تحليل شامل للحذف منطقتين غنيتين بمواقع SP1 و STAT1 تقعان بين -777 و -105 نقطة أساس (المنطقة A) و -921 و -796 نقطة أساس (المنطقة B)، على التوالي، كمسؤولتين عن النشاط النسخي العالي الملحوظ في الخلايا السرطانية. حدد تحليل الطفرات الأكثر تفصيلاً متبوعًا بـ EMSA و ChIP مواقع Sp1 في المواضع -668/-659 و -269/-247 بالإضافة إلى مواقع STAT1 في المواضع -880/-869 و -793/-782 كعناصر مسؤولة عن نشاط المحفز المرتفع في خلايا سرطان الثدي بالنسبة للخلايا الظهارية الثديية الطبيعية. أدى إسكات الحمض النووي الريبي لـ Sp1 و STAT1 في خلايا سرطان الثدي إلى تقليل PKCi mRNA والتعبير البروتيني، بالإضافة إلى نشاط معزز PRKCE. علاوة على ذلك، تم العثور على علاقة قوية بين مستويات PKCi و phospho - Ser -727 (نشط) STAT1 في خلايا سرطان الثدي. قد يكون لنتائجنا آثار كبيرة على تطوير مناهج لاستهداف بي كي سي أو ومستجيباته في علاجات السرطان.